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當前非洲豬瘟疫苗的研究進展如何了?

2018-10-10 10:13:57來源:執業獸醫作者:執業獸醫編輯:bianji2
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  9月26日的國務院常務會議,會上關于部分地方非洲豬瘟疫情、防控工作和下一步強化措施提出要求。會議指出,要開展綜合防治、疫苗研發等關鍵技術攻關。那么,當前非洲豬瘟疫苗的研究進展如何呢?
  非洲豬瘟是由非洲豬瘟病毒(ASFV)感染引起家豬、疣豬、歐洲野豬和美洲野豬的一種傳染性極強的出血性疾病。所有年齡的豬都易感。世界動物衛生組織(OIE)將其列為法定報告的動物疫病,我國將其列為一類動物疫病。
  由于ASFV的抗感染機制十分復雜、基因型多(22個基因型)且病毒容易變異,故ASF疫苗一直未研究成功,但國外科學家一直在不斷嘗試。
  一、滅活疫苗
  滅活疫苗作為最經典的疫苗研制方式,在非洲豬瘟發現之后即已開始研發,但早期落后的滅活工藝無法取得滿意的制苗效果。例如經加熱,復方碘溶液,甲苯,福爾馬林,結晶紫,β-丙內酯,乙酰氮丙啶和縮水甘油醛處理的ASF滅活疫苗雖部分能刺激豬產生抗體但即使借助佐劑仍無法抵御ASFV的攻擊。感染豬的脾組織加上佐劑制作的疫苗保護范圍有限且保護率也只有70%,攻毒后存活下來的豬也都表現臨床癥狀。
  越來越多的科學家認識到細胞免疫在抵抗ASFV的感染過程中起到至關重要的作用。但是由于滅活疫苗本身的原因,很難刺激機體產生高水平的細胞免疫,盡管使用了目前為止效果最好的佐劑,對于刺激機體產生細胞免疫反應的程度也是非常有限,完全達不到有效的保護效果。
  小結:
  1、ASF滅活疫苗免疫后可產生高效價的抗體,但很難檢測到中和抗體的存在;
  2、迄今為止,采用多種傳統方法制備的ASF滅活疫苗均不能對強毒攻擊提供有效的免疫保護;
  3、自家滅活疫苗也無效;
  4、細胞免疫在ASF疫苗免疫保護中起重要作用。
  二、弱毒疫苗
  1、傳代弱毒苗
  傳代過程中,ASFV致病力逐漸下降,同時病毒免疫原性和穩定性也隨之下降。在葡萄牙和西班牙進行的田間試驗,特別是在葡萄牙,550,000只豬免疫后有128,684只出現嚴重的免疫副反應,肺炎、運動障礙、皮膚潰瘍、流產甚至死亡,同時出現大量病毒攜帶豬。而且隨后出現的ASF疫情中分離的弱毒株也很有可能來自此次疫苗接種。
  Krug等人利用分離株ASFV-G在Vero細胞中進行傳代至第110代完全喪失毒力,接種家豬后又不能獲得相應的保護力。
  所以傳代致弱的ASFV安全性較差同時也不能提供有效的免疫保護。
  2、天然弱毒苗
  采用天然致弱ASFV毒株免疫動物能夠產生較好的針對同源強毒株的攻毒保護,保護率在66%~100%之間。
  以OURT88/3免疫并用致弱性OURT88/1毒株進行加強免疫后,可以增加I 型干擾素的產生和增強干擾素的反應強度,可誘導機體產生針對ASFV I型不同分離毒株的交叉保護,但是可造成諸多副反應。
  3、重組弱毒苗
  隨著全基因測序技術的不斷成熟以及ASFV基因功能的不斷探索,通過基因敲除毒力基因或者免疫抑制基因的方式制備ASF弱毒疫苗的可能性越來越大。
  研究表明,一些ASFV毒株在缺失某些毒力基因或免疫抑制基因后,缺失毒株接種宿主毒力減弱且可誘導產生針對同源母本毒株或異源毒株的特異性免疫保護。例如,多基因家族360和530里面的基因,胸苷激酶基因和B119L或9GL基因,這些基因刪除后可以降低病毒的毒力;例如,編碼A238L蛋白、CD2v 蛋白、C-型凝集素和細胞凋亡抑制因子的基因被刪除后可能會對豬產生適當的保護反應。
  小結:
  1、弱毒活疫苗能夠誘導強烈持久的免疫應答,但生物安全是其使用的主要限制因素;
  2、通過基因重組、靶向缺失以及一次性侵染技術來增強弱毒活疫苗的安全性。
  三、載體疫苗
  Lokhandwala等人將ASFV p32、p54等基因分別重組入人腺病毒Ad5載體中,能夠獲得良好的抗原特異性反應。
  也有學者將ASFV保護性抗原重組入腺病毒或痘病毒載體,以期獲得更好的細胞免疫反應。但上述研究仍需通過攻毒保護試驗來驗證病毒活載體疫苗在使用中是否具有可行性。
  四、核酸疫苗
  核酸疫苗也就是DNA疫苗,是指將編碼某種抗原蛋白的重組真核表達載體直接注射到動物體內,使外源基因在宿主細胞的表達系統內合成抗原蛋白,誘導宿主產生針對該抗原蛋白的特異性的體液免疫和細胞免疫應答,以達到預防和治療疫病的目的。
  Argilaguet等將P30和P54基因與豬白細胞抗原II的特異性抗體單鏈可變區在真核表達載體中融合表達;接種該疫苗后,能夠使部分動物獲得一定的免疫保護效果。
  雖然根據一個或兩個ASFV抗原構建的DNA疫苗并不能誘導產生高水平的免疫保護效果,但是通過表達文庫構建的4029個表達質粒進行的免疫攻毒保護試驗結果來看,保護率達到60%,且免疫攻毒后存活的豬無排毒現象,這標志了核酸疫苗邁出的一大步。
  小結:隨著ASFV基因組及保護性抗原的不斷深入研究以及表達載體的不斷改造優化,DNA疫苗一定會在未來ASF疫苗市場上占據一席之地。
  五、亞單位疫苗
  ASF亞單位疫苗的研究策略主要是將具有中和表位的非洲豬瘟病毒保護性抗原基因在原核或真核細胞中表達,并將產生的蛋白質或多肽遞呈給抗原遞呈細胞,以誘導產生高滴度的抗非洲豬瘟病毒的中和抗體。
  P72,P30和P54是感染過程中引起體液免疫應答最重要的3個抗原蛋白。針對P30的抗體可以阻止病毒內吞,針對P72和P54的抗體可以阻止病毒吸附,但是將這三個蛋白制備疫苗具有一定的局限性。有研究表明,用p30和p54蛋白制備的疫苗僅能提供50%的保護,P54/30重組蛋白不能提供免疫保護,僅能延緩臨床癥狀的出現時間和降低病毒血癥水平。而多項試驗都表明了單純的將蛋白作為疫苗使用有多方面的不足。
  小結:單純依靠一個或幾個病毒基因表達的蛋白很難達到免疫預防效果。
  總結:
  傳染病流行的三個基本環節是:傳染源、傳播途徑和易感動物。我們現在能做的就是控制傳染源和切斷傳播途徑,易感動物暫無有效疫苗保護,且近期也不會有有效的疫苗出現。
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